SYBR Green I(10000×)電泳用
SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡(jiǎn)單:無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低??蛇m用于多種電泳分析。
SYBR Green I(10000×)電泳用
D0028 SYBR Green I(10000×)電泳用 NobleRyder 100ul 420.00
SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡(jiǎn)單:無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低??蛇m用于多種電泳分析。
SYBR Green I適合于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠,聚丙烯酰胺凝膠電泳,脈沖電場(chǎng)凝膠電泳,和毛細(xì)管電泳等。
SYBR Green I與雙鏈DNA的親和力非常高,因此可以用做電泳前染色,對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等)沒有抑制作用。另外,SYBR Green I與EB相比,誘變能力大大降低。
SYBR Green I核酸染料特點(diǎn)
高靈敏:至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。
信噪比高:樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低。
操作簡(jiǎn)單:無須脫色或沖洗。
適用范圍廣:可適用于多種電泳分析。
使用方便:不影響其它修飾酶作用。
安全性高:分子克隆上明確誘變能力很低
使用方法
SYBR Green I預(yù)染方法
1.該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳
2.工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍,即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。
3.制膠:按常規(guī)方法制膠,不含任何染料。
4.樣品染色:向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘,使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。
5.DNA Marker染色:將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻,室溫放置5分鐘,使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。(商品Marker稀釋2-5倍后再電泳,否則電泳條帶會(huì)變形,特別是大片段。)
6.上樣、電泳:按常規(guī)操作。
SYBR Green I后染方法
1.按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
2.用PH=7.0-8.5的緩沖液(如:TAE,TBE或TE),按照10000:1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液,混勻,制成染色溶液。
3.將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘,染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色,將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上,讓工作液均勻地覆蓋整個(gè)膠板,并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4.用紫外儀觀測(cè)。
SYBR Green I使用注意事項(xiàng)
1.在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中,電泳時(shí)間不要超過2小時(shí),否則SYBR GreenⅠ會(huì)從DNA上分離出來,會(huì)產(chǎn)生彌散狀條帶。
2.在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中,SYBR Green I可以全部從雙鏈核酸上去掉。
3.如果想對(duì)用 SYBR Green I 染過的膠進(jìn)行Southern blots,建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS。
4.在紫外照射透視下,與雙鏈DNA接合的SYBR Green I呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈DNA則顏色為橘黃而不是綠色。
5.SYBR Green對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 品牌 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
R0920 | 10×MOPS 緩沖液 | NobleRyder | 500ml | 240.00 |
R0926 | 4×甲醛變性膠上樣緩沖液 | NobleRyder | 1ml | 80.00 |
D0031 | 40%丙烯酰胺/甲叉溶液(19:1) | NobleRyder | 100ml/500ml | 80.00/280.00 |
D0020 | 5×TBE 緩沖液 | NobleRyder | 500ml | 120.00 |
D0021 | 50×TAE 緩沖液 | NobleRyder | 500ml | 160.00 |
D0032 | 6×DNA loading buffer | NobleRyder | 5ml | 42.00 |
R0921 | 6×RNA loading buffer | NobleRyder | 1ml | 40.00 |
D0025 | GoldView核酸染色劑(EB替代品) | NobleRyder | 1ml/100ml | 80.00/4000.00 |
D0028 | SYBR Green I(10000×)電泳用 | NobleRyder | 100ul | 420.00 |
P0350 | 剝離硅烷/疏水硅烷(Repel—Silane) | NobleRyder | 250ml | 200.00 |
P0360 | 親和硅烷bind-silane | NobleRyder | 100ml | 280.00 |
D0102 | 快速電泳緩沖液(20×) | NobleRyder | 500ml | 100.00 |